Berita

Javascript saat ini dinonaktifkan di browser Anda.Beberapa fitur situs web ini tidak akan berfungsi jika JavaScript dinonaktifkan.
Daftar dengan rincian spesifik Anda dan obat tertentu yang diminati, dan kami akan mencocokkan informasi yang Anda berikan dengan artikel di database kami yang luas dan mengirimkan salinan PDF kepada Anda segera.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departemen Penyakit Menular, Rumah Sakit Afiliasi Pertama Universitas Suzhou, Kota Suzhou, Provinsi Jiangsu, 215000 Telp.tumor sistem pencernaan dengan kelangsungan hidup keseluruhan 5 tahun sebesar 14,1%.Banyak pasien dengan HCC didiagnosis pada stadium lanjut, sehingga skrining dini sangat penting untuk mengurangi kematian akibat HCC.Selain indikator deteksi yang umum digunakan seperti serum alpha-fetoprotein (AFP), lens lectin-reactive alpha-fetoprotein (AFP-L3), dan protrombin abnormal (protein II akibat defisiensi vitamin K, PIVKA-II), teknik biopsi cairan Telah terbukti memiliki nilai diagnostik dalam mendeteksi HCC.Dibandingkan dengan prosedur invasif, biopsi cairan dapat mendeteksi metabolit maligna yang bersirkulasi.Teknik biopsi cairan mendeteksi sel tumor yang bersirkulasi, DNA tumor yang bersirkulasi, RNA yang bersirkulasi, dan eksosom dan digunakan untuk skrining awal, diagnosis, dan evaluasi prognostik HCC.Artikel ini mengulas biologi molekuler dan penerapan berbagai teknik biopsi cairan untuk mengisolasi biomarker yang menjanjikan yang mungkin merupakan pilihan yang layak untuk penilaian awal HCC guna meningkatkan skrining awal kelompok HCC berisiko tinggi.Kata kunci: teknik biopsi cairan, karsinoma hepatoseluler, kelompok risiko tinggi.
Karsinoma hepatoseluler (HCC) adalah tumor ganas umum dari saluran pencernaan, peringkat keenam di antara kasus baru tumor ganas pada pria dan wanita.1 Di seluruh dunia, kanker hati adalah penyebab kematian ketiga akibat kanker setelah kanker paru-paru dan kolorektal, terhitung 8,3% dari kematian terkait kanker dari semua neoplasma ganas.1 Prognosis HCC berhubungan erat dengan stadium saat diagnosis.Alasan utama untuk kelangsungan hidup yang buruk di HCC adalah metastasis intrahepatik, trombus tumor vena portal, dan metastasis jauh yang menghalangi reseksi, dan banyak dari karakteristik ini sudah ada pada pasien pada saat diagnosis.
Berdasarkan pedoman diagnostik dan pengobatan, faktor risiko utama untuk mengembangkan HCC adalah sirosis hati, infeksi virus hepatitis B kronis (HBV) atau virus hepatitis C (HCV), penyakit hati berlemak alkoholik, dan penyakit hati berlemak non-alkohol (NAFLD). ).2 Selain itu, faktor risiko HCC termasuk asupan makanan yang terkontaminasi aflatoksin, schistosomiasis, penyebab lain sirosis, riwayat keluarga kanker hati, diabetes, obesitas, merokok, dan cedera hati akibat obat.Kelompok risiko tinggi berusia 35 dan 45 tahun harus melakukan pemeriksaan kesehatan secara teratur.Skrining dini adalah strategi pengobatan dini yang penting untuk meningkatkan kelangsungan hidup pasien dengan HCC secara keseluruhan.
Biomarker seperti AFP, AFP-L3 dan PIVKA-II direkomendasikan untuk skrining awal HCC3,4.Teknik biopsi cair telah menunjukkan hasil yang menjanjikan dalam diagnosis dini dan evaluasi pengobatan.5,6 Kemajuan yang signifikan telah dibuat dalam biopsi cairan HCC, yang mungkin memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang lebih tinggi daripada penanda serum yang umum digunakan seperti AFP (Tabel 1).
AFP adalah biomarker yang banyak digunakan di HCC dan saat ini merupakan biomarker paling rinci yang banyak digunakan untuk skrining awal, diagnosis, dan evaluasi penyakit.Tingkat AFP yang terus meningkat dianggap sebagai faktor risiko untuk perkembangan HCC.7,8 Tingkat deteksi karsinoma hepatoseluler kecil (sHCC) meningkat dengan perkembangan USG dan computed tomography, dan AFP telah ditemukan sangat tidak sensitif terhadap deteksi hHCC dalam praktek klinis.Menurut penelitian multisenter retrospektif9, AFP positif ditemukan pada 46% (616/1338) kasus HCC dan 23,4% (150/641) kasus sHCC.Selain itu, kadar AFP meningkat pada pasien dengan penyakit hati kronis dan sirosis.10 Jadi, AFP memiliki efek skrining terbatas untuk sHCC.11 Menurut Pedoman Praktek Klinis Asia-Pasifik untuk Karsinoma Hepatoseluler, penggunaan AFP tidak dianjurkan.12 Bukti klinis menunjukkan bahwa PIVKA-II lebih unggul daripada AFP dalam pengobatan HCC dan bahwa kombinasi PIVKA-II dan AFP memiliki nilai diagnostik yang lebih tinggi di HCC.13 Dibandingkan dengan biopsi jaringan, biopsi cairan terutama mendeteksi metabolit terkait tumor dalam cairan tubuh (darah, air liur, cairan pleura, cairan serebrospinal, atau urin) dan kurang invasif ke jaringan.14 Selain itu, biopsi cair dapat mencerminkan gambaran ganas yang tidak ada pada jaringan tumor primer.15 Biopsi cair belum diuji dalam praktik klinis untuk semua jenis tumor, tetapi potensi diagnostiknya pada kanker menarik perhatian ahli onkologi.16 Biopsi cairan dapat mendeteksi sel tumor yang bersirkulasi (CTC), DNA tumor yang bersirkulasi (cDNA), RNA bebas yang bersirkulasi (ecRNA), dan eksosom.Pada artikel ini, kita akan membahas karakteristik, peran, dan penerapan berbagai teknik biopsi cairan dalam skrining dini kelompok HCC risiko tinggi.
DNA ekstraseluler (cfDNA) dalam sampel darah dari individu yang sehat pertama kali dijelaskan pada tahun 1948 oleh Mandel et al.17 cfDNA adalah fragmen DNA bebas sel dengan panjang sekitar 160-180 bp, terutama berasal dari limfosit dan sel myeloid.ctDNA adalah fragmen DNA mutan spesifik yang dilepaskan oleh sel tumor ke dalam darah tepi, yang mewakili informasi genom sel tumor setelah proses patofisiologi tertentu, termasuk nekrosis, apoptosis, dan ekskresi.Proporsi ctDNA dalam total cfDNA sangat bervariasi dengan jenis tumor, dan fragmen cDNA dilaporkan biasanya kurang dari 167 bp panjangnya.18 Studi Underhill menunjukkan bahwa fragmen cfDNA umumnya lebih pendek dari cfDNA normal.19 Dibandingkan dengan individu yang sehat, panjang total fragmen cfDNA dalam darah pasien kanker lebih pendek, sehingga cfDNA dapat digunakan sebagai indikator skrining tumor dini.Pengayaan subset tertentu dari panjang fragmen cfDNA dapat meningkatkan deteksi cDNA yang terkait dengan tumor padat non-metastatik.Penelitian telah menunjukkan bahwa ctDNA ditemukan di lebih dari 75% kanker pankreas, usus besar, kandung kemih, gastrointestinal, hati, ovarium, payudara, melanoma, dan kanker kepala dan leher stadium lanjut.20,21 Namun, jumlah ctDNA dalam darah tergantung pada lokasi tumor.22 Dalam sebuah penelitian oleh Bettegoud, pasien dengan kanker kolorektal, payudara, hati, paru-paru, dan prostat ditemukan memiliki tingkat cDNA yang lebih tinggi dalam darah mereka daripada kanker lainnya.Sebaliknya, pada pasien kanker mulut, kanker pankreas, kanker lambung, dan glioma, konsentrasi cDNA dalam darah lebih rendah.dua puluh satu
Karena ctDNA mengandung mutasi genetik yang sama dengan sel tumor primer, cDNA dapat digunakan untuk mendeteksi mutasi spesifik tumor yang heterogen dan perubahan epigenetik, termasuk metilasi, hidroksimetilasi, variasi nukleotida tunggal, dan variasi jumlah salinan.dua puluh tiga
Metilasi DNA adalah salah satu perubahan epigenetik paling umum yang mengakibatkan represi gen.Dibandingkan dengan sel normal, ada perbedaan tingkat keseluruhan metilasi genom sel tumor, terutama dalam metilasi gen supresor tumor, yang dapat dideteksi pada tahap awal, menunjukkan bahwa perubahan metilasi DNA dapat menjadi indikator awal. deteksi tumorigenesis.Gen penekan tumor yang terkait dengan HCC dapat dinonaktifkan oleh metilasi promotor, sehingga merangsang tumorigenesis.24 Metilasi DNA merupakan penanda yang ideal untuk diagnosis dini tumor karena spesifisitas jaringannya, dapat dideteksi, dan tidak bergantung pada usia.Selain itu, metilasi DNA lebih umum dibandingkan dengan mutasi somatik karena ada lebih banyak wilayah target dan beberapa situs CpG yang diubah di setiap wilayah genom target.25 Selain beberapa situs CpG, sejumlah besar lokus hipermetilasi independen dalam ctDNA telah diidentifikasi di DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1, dan RGS10.26 Xu et al.Perbandingan sampel cfDNA dari 1098 pasien HCC dan 835 kontrol sehat adalah gen yang terkait dengan HCC ditemukan berkorelasi kuat dengan tanda metilasi cDNA plasma yang sesuai.25 Berdasarkan analisis laboratorium, model prediktif dikembangkan yang mengandung 10 penanda metilasi dengan sensitivitas dan spesifisitas masing-masing 85,7% dan 94,3%, dan penanda ini sangat berkorelasi dengan massa tumor, stadium tumor, dan respons terhadap pengobatan.Hasil ini menunjukkan bahwa penggunaan penanda metilasi cDNA sangat menjanjikan dalam diagnosis, pemantauan, dan prognosis HCC.Dalam model metilasi yang terdiri dari tiga gen termetilasi yang menyimpang (APC, COX2, RASSF1A) dan satu miRNA (miR203) yang disajikan oleh Lu et al27, sensitivitas dan spesifisitas model 27 untuk mendiagnosis HCC terkait HBV sebanding.80%.Selain itu, model dapat mendeteksi 75% pasien HCC yang tidak terdiagnosis dengan tingkat AFP 20 ng/mL.Gen untuk protein 1A keluarga domain terkait Ras (RASSF1A) adalah urutan DNA berulang utama dalam genom manusia.Araujo dkk.menyimpulkan bahwa hipermetilasi promotor RASSF1A bisa menjadi biomarker yang berharga untuk skrining awal HCC dan target molekuler potensial untuk terapi epigenetik.28 Dalam satu penelitian, hipermetilasi promotor RASSF1A serum ditemukan pada 73,3% pasien dengan HCC.29 Elemen nukleotida yang diselingi panjang 1 (LINE-1) adalah mediator retrotransposisi lain yang sangat aktif.Hipometilasi LINE-1 ditemukan dalam DNA dari 66,7% sampel serum HCC dan dikaitkan dengan kekambuhan dini dan kelangsungan hidup yang buruk setelah reseksi radikal.29 Hipermetilasi adalah proses genetik umum yang memainkan peran unik dalam perkembangan sirosis hati dan kanker hati.30 Sebaliknya, hidroksimetilasi adalah proses demetilasi yang menginduksi reaktivasi dan ekspresi gen, dan deteksi produk 5-hidroksimetilsitosin (5-hmC) dalam proses ini dapat digunakan untuk mengidentifikasi tumor.Metilasi dan hidroksimetilasi cDNA dikaitkan dengan tumorigenesis dan dapat berkontribusi pada skrining awal HCC.Dalam sebuah penelitian terhadap 2554 subjek, 31 genom 5-hmCs lebar ditemukan dalam sampel cfDNA, dan 32 gen diidentifikasi dengan membandingkan urutan 5-hmC pada pasien HCC dan kelompok berisiko tinggi seperti mereka yang memiliki penyakit kronis.Model diagnostik penyakit hati.dan sirosis.Model ini lebih unggul dari AFP dalam membedakan HCC dari jaringan non-tumor.
Mutasi di daerah pengkodean dapat menyebabkan kelainan transkripsi, yang dapat menyebabkan perubahan urutan protein dan akhirnya kanker.Varian nukleotida tunggal adalah penanda genomik penting untuk skrining tumor dini karena keandalan jaringan yang tinggi dan spesifisitas tumor dan jaringan yang tinggi.Sejumlah penelitian terkait HCC menggunakan sekuensing generasi berikutnya (NGS) untuk exome dan sekuensing seluruh genom kanker telah mengidentifikasi gen seluler bermutasi umum seperti TP53 dan CTNNB1, serta beberapa termasuk ARID1A, MLL, IRF2.Gen baru, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 dan JAK1 menunjukkan tingkat mutasi sedang. Analisis fungsi gen mutan menunjukkan bahwa perubahan dalam remodeling kromatin, transduksi sinyal Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, jalur siklus sel P53, pengubah epigenetik, jalur stres oksidatif, jalur PI3K/AKT/MTOR dan jalur RAS/RAF/ Jalur MAPK kinase memainkan peran penting dalam onkogenesis HCC.32,33 Dalam sebuah penelitian di mana mutasi terkait tumor terdeteksi, Huang et al menemukan bahwa frekuensi mutasi terkait tumor yang bergantung pada ctDNA adalah 19,5%, dan spesifisitasnya adalah 90% 0,34 Selain itu, pasien yang mengalami invasi vaskular lebih mungkin mengalami mutasi ctDNA (P=0,041) dan kelangsungan hidup bebas rekurensi yang lebih pendek (P<0,001). Analisis fungsi gen mutan menunjukkan bahwa perubahan dalam remodeling kromatin, transduksi sinyal Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, jalur siklus sel P53, pengubah epigenetik, jalur stres oksidatif, jalur PI3K/AKT/MTOR dan jalur RAS/RAF/ Jalur MAPK kinase memainkan peran penting dalam onkogenesis HCC.32,33 Dalam sebuah penelitian di mana mutasi terkait tumor terdeteksi, Huang et al menemukan bahwa frekuensi mutasi terkait tumor yang bergantung pada ctDNA adalah 19,5%, dan spesifisitasnya adalah 90% 0,34 Selain itu, pasien yang mengalami invasi vaskular lebih mungkin mengalami mutasi ctDNA (P=0,041) dan kelangsungan hidup bebas rekurensi yang lebih pendek (P<0,001).Analisis fungsi gen mutan menunjukkan bahwa perubahan dalam remodeling kromatin, pensinyalan Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, jalur siklus sel P53, pengubah epigenetik, jalur stres oksidatif, jalur PI3K/AKT/MTOR, dan jalur RAS/RAF/MAPK kinase berperan peran penting dalam tumorigenesis HCC.32,33 Dalam sebuah penelitian yang menemukan mutasi terkait tumor, Huang et al.menemukan bahwa frekuensi mutasi terkait tumor yang bergantung pada ctDNA adalah 19,5% dan spesifisitasnya adalah 90%..34 оме ого, ациентов осудистой азией аще ечались ации (P=0,041) олее ороткая езрецидивная аемость (P<0,001). 0,34 Selain itu, pasien dengan invasi vaskular memiliki lebih banyak mutasi cDNA (P=0,041) dan kelangsungan hidup bebas penyakit yang lebih pendek (P<0,001).Analisis fungsional gen mutan mengungkapkan remodeling kromatin, pensinyalan Wnt/β-catenin dan JAK/STAT, jalur siklus sel P53, pengubah epigenetik, jalur stres oksidatif, jalur PI3K/AKT/MTOR, dan jalur RAS/RAF/MAPK jalur kinase memainkan peran penting dalam onkogenesis HCC. 32,33 Huang ctDNA 19,5%，特异性为90% .34 ctDNA P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32,33 到 的 huang 肿瘤 相关 突变 19,5% ， 特异性 90% .34 此外 侵犯 的 ctdna突变（P=0,041）和更P<0,001）。32,33 Dalam sebuah penelitian yang menemukan mutasi terkait tumor, Huang et al.menemukan bahwa mutasi terkait tumor adalah 19,5% tergantung pada cDNA dengan spesifisitas 90% 34. Selain itu, pasien yang telah menjalani invasi vaskular lebih mungkin untuk mengembangkan cDNA.ация (P = 0,041) олее ороткая езрецидивная аемость (P <0,001). mutasi (P=0,041) dan kelangsungan hidup bebas penyakit yang lebih pendek (P<0,001).Gen driver HCC umum lainnya adalah TP53, yang memiliki tingkat mutasi lebih dari 30%.Penelitian telah menunjukkan bahwa frekuensi mutasi TP53 pada ctDNA dalam darah dan urin berkisar antara 5% hingga 60%.35 Studi Johan menunjukkan bahwa spektrum mutasi ctDNA pada HCC lanjut memiliki tingkat mutasi yang mirip dengan HCC awal, termasuk promotor TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutasi pada AXIN1 ., ARID2, KMT2D dan TSC2 (masing-masing 6%).36 Onkogen -catenin (CTNNB1) memainkan peran penting dalam jalur pensinyalan Wnt.Koaktivator transkripsi CTNNB1 dapat mempromosikan ekspresi gen, yang dapat menyebabkan proliferasi sel, penghambatan apoptosis, dan angiogenesis.CTNNB1 juga dapat berinteraksi dengan TERT untuk menginduksi transformasi hepatosit.33 Promotor TERT sering bermutasi pada beberapa tumor padat.Perubahan TERT, salah satu perubahan genetik paling awal dalam transformasi ganas HCC, dapat menyebabkan reaktivasi telomerase pada hepatosit sirosis dan dapat meningkatkan proliferasi dan mencegah penuaan.Mutasi pada promotor 33-37 TERT telah dilaporkan terjadi pada 59-90% pasien dengan nodul hati proliferatif dan kanker hati dini dan berhubungan dengan kelangsungan hidup.38
Perubahan nomor salinan (CNA) adalah subtipe penting dari mutasi somatik.Penelitian telah menunjukkan bahwa beban CNA yang tersebar luas dan fokus adalah tanda genomik yang mampu memprediksi infiltrasi dan eksklusi imun tumor pada beberapa jenis kanker.39 Pensinyalan infiltrasi aktif, aktivitas sitolitik tinggi, peradangan parah dan penanda genetik yang terkait dengan presentasi antigen di HCC.Analisis susunan data polimorfisme nukleotida tunggal pada 477 subjek mengungkapkan beban yang rendah pada SSP.Sebaliknya, tumor yang tidak stabil secara kromosom dengan beban CNA ekstensif yang tinggi menunjukkan tanda-tanda penolakan imun dan dikaitkan dengan proliferasi, perbaikan DNA, dan disfungsi TP53.Xu dkk.menunjukkan bahwa kelompok HCC memiliki skor CNA lebih tinggi daripada kelompok penyakit hati kronis.40 Menggunakan sekuensing seluruh genom dari satu sel, CNA ditemukan muncul di awal hepatokarsinogenesis dan tetap relatif stabil selama perkembangan tumor.41 Chung dkk.menemukan bahwa tingkat cfDNA meningkat secara signifikan pada pasien HCC dan bahwa CNA genom-lebar dalam cfDNA adalah penanda prognostik independen yang penting pada pasien HCC yang diobati dengan sorafenib.42 Pasien dengan beban CNA yang lebih tinggi lebih mungkin untuk memiliki perkembangan penyakit dan kematian dibandingkan dengan beban CNA yang lebih rendah.Ollerich dkk.menemukan bahwa indeks ketidakstabilan nomor salinan (CNI) dapat digunakan untuk menilai CNA pada cfDNA pasien kanker.Mereka mencatat bahwa pasien dengan kanker stadium lanjut memiliki skor CNI yang secara signifikan lebih tinggi daripada kelompok kontrol, yang menilai respons pasien terhadap kemoterapi sistemik dan imunoterapi.43 Hasil ini menunjukkan bahwa CNA yang ditemukan dalam spesimen biopsi cair dapat berfungsi sebagai indikator prognostik pada pasien dengan kanker stadium lanjut.HCC dengan latar belakang terapi sistemik.
Saat ini, metode yang digunakan untuk mendeteksi ctDNA dapat dibagi menjadi metode yang ditargetkan dan non-target.Secara singkat, metode yang ditargetkan seperti reaksi berantai polimerase digital (dPCR), PCR digital BEAMing, Sistem Mutasi Refraktori Amplifikasi-PCR, Capp-Seq dan Tam-Seq sangat sensitif terhadap gen yang telah ditentukan.Metode di luar target seperti pengurutan seluruh genom dan NGS memberikan pandangan komprehensif tentang seluruh lanskap genom.44 Dibandingkan dengan panel target, sekuensing seluruh genom dapat mendeteksi tidak hanya mutasi titik dan penyisipan, tetapi juga penataan ulang dan variasi jumlah salinan.prognosis, dan CTC dan cfDNA adalah indikator yang baik yang dapat digunakan untuk pemantauan dinamis HCC.45 Selain itu, analisis cfDNA mungkin lebih berguna dalam mendeteksi HCC.Yan dkk.menunjukkan bahwa cfDNA dalam plasma pasien dengan HCC secara signifikan lebih tinggi dibandingkan pada pasien dengan fibrosis hati dan kontrol yang sehat.Dibandingkan dengan AFP, ctDNA diharapkan menjadi penanda skrining yang lebih baik untuk kanker hati dini.46 Dalam studi prospektif dari 47 biopsi cair yang menguji cfDNA dan protein dalam populasi populasi, mereka terbukti efektif dalam membedakan pasien dengan HCC dari pasien tanpa HCC.Dalam tindak lanjut dari 331 pasien USG normal dan AFP-negatif, sensitivitas dan spesifisitas cfDNA untuk mendiagnosis HCC masing-masing adalah 100% dan 94%, sehingga cDNA dapat mendeteksi HCC pada individu seropositif HBsAg tanpa gejala.Dalam studi Yeo48, frekuensi tinggi (92,5%) hipermetilasi promotor RASSF1A ditemukan pada pasien dengan HCC.Selain itu, Xu et al.menciptakan model diagnostik untuk memprediksi HCC menggunakan panel penanda metilasi spesifik dengan spesifisitas dan sensitivitas masing-masing 90,5% dan 83,3%.Panel memungkinkan pasien dengan HCC untuk dibedakan dari pasien dengan penyakit hati lainnya, yang lebih baik dari AFP.Mereka juga menemukan bahwa kontrol normal yang dites positif mungkin memiliki faktor risiko HCC, seperti infeksi HBV atau riwayat penggunaan alkohol.25 Kami berhipotesis bahwa faktor risiko tinggi untuk HCC dapat mempromosikan hipermetilasi cfDNA, yang kemudian berkontribusi pada perkembangan HCC, dan dengan demikian cfDNA dapat memainkan peran kunci dalam skrining untuk kelompok berisiko tinggi.Cai dkk.merangkum berbagai mutasi ctDNA dan menawarkan strategi yang kuat untuk menilai beban tumor pada pasien.49 Strategi ini dapat mengidentifikasi tumorigenesis median 4,6 bulan sebelum perubahan pencitraan dan telah menunjukkan kinerja diagnostik yang unggul dibandingkan dengan serum biomarker AFP, AFP-L3, dan PIVKA-II.Nilai diagnostik pengujian cDNA telah ditunjukkan ketika evaluasi gambar tidak tersedia, sehingga pengujian cDNA bernilai dalam diagnosis HCC dini pada kelompok berisiko tinggi.Baru-baru ini, para ilmuwan menggunakan teknologi NGS untuk menganalisis indikator variasi genetik multivariat (termasuk 5-hydroxymethylcytosine, 5′-motif, fragmentasi, jejak nukleosom, HIFI) dalam 3204 sampel klinis dan cfDNA.50 Model HIFI yang divalidasi ulang dengan tiga rangkaian uji, uji, dan rangkaian independen menunjukkan diskriminasi yang stabil dan andal antara populasi HCC dan non-HCC dengan sensitivitas masing-masing 95,79% dan 95,42% dalam uji dan set uji spesifik HCC.Jenis kelamin masing-masing adalah 95,00% dan 97,83%.Nilai diagnostik metode HIFI lebih tinggi daripada AFP dalam membedakan HCC dari sirosis.Selain itu, ctDNA juga digunakan dalam perawatan bedah.Atsushi dkk.menentukan kadar serum ctDNA sebelum operasi pada pasien dengan HCC dan menemukan bahwa tingkat kekambuhan dan tingkat metastasis ekstrahepatik pada kelompok cDNA positif secara signifikan lebih tinggi daripada pada kelompok cDNA negatif, dan tingkat cDNA berkorelasi secara signifikan.dengan perkembangan tumor.51 Menjadi biomarker yang sangat sensitif, ctDNA dapat memprediksi kemampuan HCC untuk menyerang pembuluh darah.Wang dkk.dilakukan sekuensing seluruh genom 46 pasien dengan HCC, dan analisis multivariat menunjukkan bahwa nilai ambang frekuensi alel varian cDNA untuk invasi ke pembuluh mikro adalah 0,83%, sensitivitas 89,7% dan spesifisitas 80,0%.faktor risiko independen untuk invasi mikrovaskular pada HCC yang dapat direseksi, menunjukkan bahwa cDNA dapat membantu memandu pengobatan yang optimal.Kesimpulannya, ctDNA sepenuhnya terlibat dalam terjadinya dan perkembangan HCC dan dapat digunakan untuk skrining awal, evaluasi bedah, dan pemantauan penyakit.
CTC adalah sel ganas yang berasal dari tumor primer atau metastasis yang bermetastasis ke aliran darah.Sel tumor mengeluarkan matrix metalloproteinases (MMPs), yang memecah membran basal, memungkinkan sel tumor untuk langsung masuk ke pembuluh darah dan limfa.Namun, sebagian besar CTC dengan cepat dihilangkan oleh anoikis, serangan kekebalan, atau tegangan geser.53 Transisi epitel-mesenkimal (EMT) memungkinkan CTC mudah diisolasi dari jaringan tumor primer, menginvasi kapiler, dan memperoleh peningkatan kelangsungan hidup, metastasis, invasi, dan resistensi obat secara signifikan.Penelitian telah menunjukkan bahwa ada heterogenitas yang mendalam di antara berbagai sel tumor pada tumor metastatik primer.Dengan demikian, analisis CTC dapat mengarah pada pemahaman yang komprehensif tentang heterogenitas sel tumor.54
Penanda khusus untuk CTC terkait HCC termasuk glypican-3 (GPC3), reseptor asialoglycoprotein (ASGPR), molekul adhesi sel epitel (EpCAM) dan penanda terkait sel induk seperti CD44, CD90, 55 dan molekul adhesi antar sel 1 (ICAM1).) .56 Penanda GPC3 adalah protein berlabuh membran sel yang secara klinis digunakan untuk analisis patologis dan karakterisasi HCC.57 Ekspresi GPC3 lebih umum pada sel tumor HCC dengan diferensiasi menengah dan rendah dan mendorong migrasi ekstrahepatik;selain itu, adanya GPC3+ CTC menunjukkan metastasis HCC.58 ASGPR adalah protein transmembran yang diekspresikan hanya pada permukaan hepatosit dan sangat diekspresikan dalam HCC yang berdiferensiasi baik.EpCAM adalah salah satu protein terkait membran yang paling umum digunakan untuk menangkap CTC.EpCAM telah diidentifikasi sebagai penanda permukaan sel HCC dengan karakteristik sel punca,59 yang berkorelasi dengan berbagai fitur klinikopatologis HCC, seperti invasi vaskular, penilaian kadar AFP, dan kanker hati stadium lanjut di Rumah Sakit Barcelona (BCLC).Fenotip EMT 60 CTC sangat bermetastasis.54 Proses EMT di CTC mempromosikan metastasis HCC.Ekspresi penanda EMT seperti vimentin, twist, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, siput, siput, dan E-cadherin telah dipelajari dalam CTC yang diturunkan dari hati dari pasien HCC.58 Sistem CanPatrol™ yang dikembangkan oleh Cheng [61] mengklasifikasikan CTC menjadi tiga subkelompok fenotip berdasarkan penanda yang diekspresikan secara dominan: fenotipe epitel (EpCAM, CK8/18/19), fenotipe mesenkim (vimentin, melingkar), dan fenotipe campuran.Pada 176 pasien, CTC total lebih unggul daripada AFP dalam membedakan HCC dari penyakit hati jinak.Nilai AUC untuk total CTC, AFP, dan gabungan total CTC dan AFP adalah 0,774 (95% CI, 0,704-0,834), 0,669 (95% CI, 0,587-0,750), dan 0,821 (95% CI, 0,756-0,886). ).), masing-masing.Klasifikasi CTC berdasarkan EMT dapat memprediksi diagnosis HCC, kekambuhan dini, metastasis, dan waktu keseluruhan yang lebih singkat.
Saat ini, metode untuk mendeteksi CSC meliputi metode fisik dan metode biologis.Metode fisik, sering disebut sebagai pengayaan berdasarkan sifat biofisik, terutama bergantung pada sifat fisik CSC, seperti ukuran, kepadatan, muatan, mobilitas dan deformabilitas.Tergantung pada sifat fisik, ada berbagai metode seperti sistem berbasis filtrasi, dielektroforesis, dll. Yang terakhir, juga dikenal sebagai pengayaan berbasis imunoafinitas, terutama didasarkan pada pengikatan antigen-antibodi karena metode ini menggunakan antibodi terhadap biomarker spesifik tumor. seperti EpCAM, ASGPR, reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER2), antigen spesifik prostat (PSA), pancytokeratin manusia (P-CK) dan carbamoyl phosphate synthase 1 (CPS1).62 Tipe lain, yang disebut metode tanpa pengayaan, menggunakan flow cytometry untuk membedakan CTC dari leukosit berdasarkan rasio dan ukuran inti-sitoplasma yang lebih tinggi.Saat ini, satu-satunya tes yang disetujui FDA untuk mendeteksi CTC adalah sistem Cell-Search™, yang menggunakan penanda permukaan sel EpCAM. Namun, deteksi CTC berbasis penanda gabungan dapat meningkatkan tingkat kepositifan.54 Campuran antibodi terhadap ASGPR dan CPS1 mencapai tingkat deteksi CTC sebesar 91% pada pasien HCC.63 Zhang et al menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P -CK dan CPS1, dan membedakan pasien HCC dari mereka dengan penyakit hati jinak atau kanker non-HCC pada tingkat 100%.64 Sebuah studi oleh Wang mendeteksi EpCAM+ CTC pada 60% dari 42 pasien HCC dan menemukan korelasi yang signifikan antara kedua kepositifan tersebut. tingkat dan jumlah CTC dengan stadium TNM.65 Guo et al menemukan bahwa skor PCR yang diturunkan dari CTC meningkat pada 125/171 (73%) pasien dengan tingkat AFP <20 ng/mL dengan sensitivitas 72,5% dan spesifisitas 95,0%, dibandingkan dengan 57,0% dan 90,0% untuk AFP pada batas 20 ng/mL.66 Kombinasi AFP dan CTC dapat meningkatkan deteksi HCC.45 Diyakini bahwa CTC memiliki keunggulan dibandingkan AFP dalam skrining awal kelompok berisiko tinggi untuk HCC. Namun, deteksi CTC berbasis penanda gabungan dapat meningkatkan tingkat kepositifan.54 Campuran antibodi terhadap ASGPR dan CPS1 mencapai tingkat deteksi CTC sebesar 91% pada pasien HCC.63 Zhang et al menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P -CK dan CPS1, dan membedakan pasien HCC dari mereka dengan penyakit hati jinak atau kanker non-HCC pada tingkat 100%.64 Sebuah studi oleh Wang mendeteksi EpCAM+ CTC pada 60% dari 42 pasien HCC dan menemukan korelasi yang signifikan antara kedua kepositifan tersebut. tingkat dan jumlah CTC dengan stadium TNM.65 Guo et al menemukan bahwa skor PCR yang diturunkan dari CTC meningkat pada 125/171 (73%) pasien dengan tingkat AFP <20 ng/mL dengan sensitivitas 72,5% dan spesifisitas 95,0%, dibandingkan dengan 57,0% dan 90,0% untuk AFP pada batas 20 ng/mL.66 Kombinasi AFP dan CTC dapat meningkatkan deteksi HCC.45 Diyakini bahwa CTC memiliki keunggulan dibandingkan AFP dalam skrining awal kelompok berisiko tinggi untuk HCC.Namun, deteksi gabungan CTC berbasis penanda dapat meningkatkan persentase hasil positif.54 Campuran antibodi anti-ASGPR dan CPS1 mencapai tingkat deteksi CTC sebesar 91% pada pasien dengan HCC.63 Zhang et al.menggunakan CTC-Chip dengan antibodi terhadap ASGPR, P-CK dan CPS1, dan juga membedakan pasien dengan HCC dari mereka dengan penyakit hati jinak atau non-HCC pada tingkat 100%.астота оличество о адией TNM.65 Guo оавторы обнаружили, о оказатель , олученный , овышен 125/171 (73%) аци ецифичность 95,0% о авнению 57,0% 90,0% ороговом овне 20 /мл.66 омбинация ожет обнаружеое .45 . frekuensi dan jumlah CTC dengan stadium TNM.65 Guo et al menemukan bahwa PCR yang berasal dari CTC meningkat pada 125/171 (73%) pasien yang memiliki kadar AFP <20 ng/mL dengan sensitivitas 72,5% dan spesifisitas 95,0% dibandingkan dengan 57,0% dan 90,0% untuk AFP pada tingkat batas 20 ng/mL.66 Kombinasi AFP dan CTC dapat meningkatkan deteksi HCC.45 CTC dianggap memiliki keunggulan dibandingkan AFP dalam skrining awal kelompok.dengan risiko tinggi HCC.Namun, deteksi gabungan CTC berbasis penanda dapat meningkatkan persentase hasil positif.54 Campuran antibodi anti-ASGPR dan CPS1 mencapai tingkat deteksi CTC 91% pada pasien dengan HCC.63 Zhang dkk.menggunakan chip CTC dengan antibodi terhadap ASGPR, P-CK dan CPS1 dan membedakan pasien dengan HCC dari penyakit hati jinak dan non-HCC dengan 100%.64 Penelitian Wang mengidentifikasi 60% CTC EpCAM+ pada 42 pasien HCC dan menemukan korelasi yang signifikan antara kejadian dan jumlah CTC pada tahap TNM. 65 Guo AFP <20 ng/mL 125/171 (73%) CTC PCR 72.5%，特异性为95.0%，而AFP 20 ng/mL 57.0% 90.0%。 65 Guo <20 ng/ml 125/171 (73%) 患者 ctc pcr 敏感性 为 72,5%， 为 95,0%， AFP 在 截止 截止 截止截止 截止 截止 20ng/mL 57.0% 90.0%。65 Guo dkk.оаружили, о 125/171 (73%) ациентов овнем <20 /мл оказатели , олученные омощью , овышены ельностью 72,5% е отсечки ецифичность оставляла 20 /мл. menemukan bahwa pada 125/171 (73%) pasien dengan kadar AFP <20 ng/mL, nilai PCR turunan CTC meningkat dengan sensitivitas 72,5% dan spesifisitas 95,0%, sedangkan AFP berada pada batas spesifisitas. adalah 20 ng/mL.ml adalah 57,0% dan 90,0%.66 Kombinasi ORP dan CTC meningkatkan deteksi HCC.45 CTC dianggap lebih unggul daripada AFP dalam skrining awal populasi HCC berisiko tinggi.Jadi, untuk kelompok HCC yang positif CTC dan berisiko tinggi, pengujian CTC harus secara rutin dikombinasikan dengan USG dan deteksi AFP.Namun, CTC dianggap sebagai prediktor penting dari metastasis dan kekambuhan tumor, dan deteksi CTC tidak direkomendasikan secara independen sebagai alat diagnostik.62 Oleh karena itu, CTC dapat berfungsi sebagai biomarker prediktif yang lebih baik daripada penanda lain yang digunakan saat ini. Zhou et al menemukan bahwa pasien dengan peningkatan jumlah EpCAM+ CTC dan sel T regulator menunjukkan risiko lebih tinggi untuk mengembangkan kekambuhan HCC, dibandingkan dengan jumlah CTC yang rendah, dengan rasio kekambuhan 66,7% vs 10,3% (P <0,001).67 Sebuah penelitian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Selain itu, Qi menemukan bahwa 101 dari 112 pasien (90,81%) dengan HCC, termasuk mereka dengan penyakit stadium awal, positif untuk CTC dan nodul HCC yang sangat kecil terdeteksi setelah 3 sampai 5 bulan masa tindak lanjut. Zhou et al menemukan bahwa pasien dengan peningkatan jumlah EpCAM+ CTC dan sel T regulator menunjukkan risiko lebih tinggi untuk mengembangkan kekambuhan HCC dibandingkan dengan jumlah CTC yang rendah, dengan rasio kekambuhan 66,7% vs 10,3% (P <0,001).67 A penelitian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Selain itu, Qi menemukan bahwa 101 dari 112 pasien (90,81%) dengan HCC, termasuk mereka dengan penyakit stadium awal, positif untuk CTC dan nodul HCC yang sangat kecil terdeteksi setelah 3 sampai 5 bulan masa tindak lanjut. о .(обнаружили, о ациентов овышенным оличеством EpCAM+ егуляторных -клеток азвития ецидива е, е аео0, е Zhou et al menemukan bahwa pasien dengan peningkatan EpCAM+ CTC dan sel T regulator memiliki risiko kekambuhan HCC yang lebih tinggi dibandingkan dengan pasien dengan CTC rendah, dengan tingkat kekambuhan 66,7% vs 10,3% (P<0,001)67.Sebuah penelitian serupa dilakukan oleh Zhong et al.68. Selain itu, Qi menemukan bahwa 101 dari 112 pasien (90,81%) dengan HCC, termasuk mereka dengan penyakit awal, memiliki CTC, dan nodul HCC yang sangat kecil terdeteksi setelah 3 sampai 5 bulan masa tindak lanjut. Zhou CTC EpCAM+ CTC T HCC 66,7% 10,3% (P <0,001)。 Zhou 人 发现 与 ctc 的 ， epcam+ ctc t 细胞 数量 的 hcc 更 分别 为 为 为 为 为 为 为 3% 10. p <0,001)。。。。。。。。。。。。。。。 о .обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou dkk.menemukan bahwa pasien dengan peningkatan EpCAM+ CTC dan sel T regulator memiliki risiko kekambuhan HCC yang lebih tinggi dibandingkan dengan pasien dengan CTC yang lebih sedikit, dengan tingkat kekambuhan masing-masing 66,7% dan 10,3% (P <0,001).Sebuah penelitian serupa dilaporkan oleh Zhong et al.68 Selain itu, Qi menemukan bahwa 101 dari 112 pasien HCC (90,81%), termasuk pasien dengan penyakit dini, memiliki hasil CTC positif dan menemukan nodul HCC yang sangat kecil setelah 3 kunjungan.Pengamatan hingga 5 bulan.Mereka juga menemukan CTC pada 12 pasien dengan infeksi HBV kronis dan menemukan tumor HCC kecil dalam waktu 5 bulan pada 2 pasien positif CTC.69 Jadi, CTC dapat digunakan untuk memprediksi HCC, 70 tetapi mereka dapat digunakan lebih rutin sebagai biomarker prediktif.
Seperti cfDNA, cfRNA dilepaskan ke aliran darah melalui berbagai sistem.Molekul-molekul ini dalam darah tepi mewakili jaringan asal kanker.Dibandingkan dengan penanda yang dideteksi dengan metode non-invasif, cfRNA lebih diatur secara dinamis, spesifik jaringan, dan berlimpah di lingkungan ekstraseluler.Signifikansi dan nilai diagnostik 71 miRNA (miRNA) di HCC telah dilaporkan dalam banyak penelitian.miRNA adalah RNA non-coding endogen (ncRNAs) yang mengatur berbagai aktivitas biologis molekuler dengan menghambat terjemahan RNA messenger target (mRNA).miRNA terletak di badan apoptosis yang dikemas dalam eksosom, tetapi mereka juga dapat secara stabil mengikat protein serum dan lipid dalam darah tepi dan dapat digunakan untuk mengevaluasi HCC.microRNAs terlibat dalam regenerasi hati, metabolisme lipid, apoptosis, peradangan, dan pengembangan HCC.72 miRNA onkogenik seperti miR-21, miR-155 dan miR-221 terkenal di HCC.Secara khusus, miR-21 memainkan peran kunci dalam sintesis kolagen dalam matriks ekstraseluler dan fibrosis dan mempromosikan hepatokarsinogenesis dengan mengaktifkan sel induk hematopoietik.72,73 MiRNA penekan tumor di HCC termasuk miRNA-122, miRNA-29, keluarga Let-7, dan keluarga miRNA-15.Keluarga Let-7 terdiri dari banyak miRNA penekan tumor yang menargetkan keluarga RAS.Keluarga miR-15 termasuk miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195, dan miR-497, yang memiliki urutan komplementer untuk mRNA tertentu.Selain itu, RNA non-coding panjang (lncRNA) dan RNA sirkular (cirRNA) juga penting untuk skrining awal HCC.lncRNA mewakili kelas ncRNA terluas, termasuk ncRNA mirip mRNA, dan terlibat dalam patogenesis banyak penyakit manusia.LncRNA memainkan peran pengaturan dalam lingkungan mikro hati dan penyakit hati kronis.74 CircRNA juga merupakan kelas ncRNA dengan banyak fungsi dalam regulasi ekspresi gen.Baru-baru ini, circRNAs telah dianggap sebagai alat diagnostik untuk HCC.
RNA bebas yang bersirkulasi memiliki stabilitas yang luar biasa, termasuk ketahanan terhadap suhu, pH, dan RNase, yang membuat isolasi fnRNA dari darah tepi tidak terlalu membosankan menggunakan metode pemurnian RNA standar.Metode yang paling umum digunakan termasuk NGS, microarray dan RT-qPCR.NGS memungkinkan microRNAs untuk diukur di seluruh genom.Namun, metode ini mahal dan analisisnya tidak standar.Sebaliknya, RT-qPCR tidak mahal, dengan cepat memperkuat asam nukleat, dan menawarkan banyak keuntungan seperti sensitivitas yang lebih tinggi, akurasi yang lebih tinggi, rentang dinamis yang lebih luas, dan membutuhkan sampel yang lebih sedikit.Microarrays adalah metode lain yang digunakan untuk deteksi miRNA berdasarkan hibridisasi sensitif dan spesifik dari miRNA target dengan probe DNA komplementer, 75 tetapi analisis data microarray memakan waktu.
MiR-122 dan Let-7 yang beredar telah dilaporkan berpotensi berguna dalam mendiagnosis HCC stadium awal pada kelompok berisiko tinggi, penanda pada pasien dengan nodul prakanker terkait HBV dan HCC stadium awal.76 Cai dkk.menemukan bahwa anggota keluarga Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126, dan miR-199a/b) berisiko terkena penyakit kronis. HCC pada pasien dengan hepatitis.Keluarga Let-7 dapat berfungsi sebagai biomarker pengganti yang efektif untuk memprediksi perkembangan HCC pada kelompok berisiko tinggi yang terkait dengan hepatitis C kronis. 77 miR-122 memiliki akurasi diagnostik yang tinggi dalam mendeteksi HCC dini pada pasien dengan sirosis hati.78 Serum MiR-107 yang bersirkulasi juga telah dievaluasi pada tahap awal HCC, 79 dan telah menunjukkan potensi yang baik pada populasi berisiko tinggi.Zhou et al melaporkan bahwa panel miRNA (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a dan miR-801) dapat membedakan HCC dari hepatitis B kronis (CHB) dan sirosis sensitivitas adalah 79,1% dan 75%, dan spesifisitas 76,4% dan 91,1%, masing-masing.80 Pada HCC terkait HBV, kami menemukan bahwa kadar miR150 berkurang secara signifikan dibandingkan dengan pasien HBV kronis tanpa HCC (sensitivitas 79,1%, spesifisitas 76,5%).-224 meningkat pada HCC dibandingkan dengan kontrol yang sehat, dan analisis subkelompok menunjukkan tingkat yang lebih tinggi pada pasien dengan HCC yang terkait dengan HBV.hepatitis B terkait sirosis dan pasien HCC mengidentifikasi pengklasifikasi siRNA yang mengandung tujuh siRNA yang diekspresikan secara berbeda yang dapat mendeteksi HCC pada kontrol yang berbeda;Kisaran AUC pada skrining awal lebih baik daripada relawan AFP.Mereka menemukan bahwa empat miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p, dan miR-365a-3p) dapat membedakan pasien dengan HCC dari pasien tanpa HCC.Lima miRNA yang diekspresikan secara berlebihan (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p, dan miR-148a-3p) dianggap sebagai infeksi HBV potensial pada HCC, sirosis, dan biomarker CHB, terutama miR-34a-5p mungkin biomarker untuk sirosis hati,85 dan mungkin biomarker potensial untuk skrining awal HCC pada populasi berisiko tinggi.LncRNA yang paling banyak dipelajari di HCC sangat aktif pada kanker hati (HULC).Penelitian lain menunjukkan bahwa HULC yang bersirkulasi pada pasien HCC dapat digunakan sebagai penanda diagnostik karena lncRNA ini sangat diregulasi pada pasien HCC dibandingkan dengan individu yang sehat.71,86 Di antara lnRNA lainnya, LINC00152 dianggap sebagai lncRNA diagnostik terbaik karena AUC, sensitivitas, dan spesifisitasnya yang tinggi.86 Dalam satu penelitian, ekspresi darah tepi LINC00152 secara bertahap meningkat dari kontrol normal yang sehat menjadi pasien dengan CHB dan sirosis, dan akhirnya tertinggi di HCC.Studi ekspresi circSMARCA5 dalam plasma pasien dengan HCC telah menunjukkan penurunan progresif dalam ekspresi HCC mulai dari hepatitis hingga sirosis dan lesi prakanker.87 Analisis kurva ROC mengkonfirmasi potensi circRNAs ini dalam membedakan pasien dengan hepatitis atau sirosis hati dari mereka dengan HCC, terutama mereka dengan tingkat AFP di bawah 200 ng/mL.Selain itu, Zhu menganalisis 13.617 RNA siklik dalam sampel plasma dari pasien HCC terkait HBV dan memastikan bahwa 6 RNA siklik diekspresikan secara berbeda pada sirosis terkait HCC dan HBV, menunjukkan bahwa cRNA mungkin bermanfaat.penanda untuk skrining awal kelompok berisiko tinggi seperti yang terkait dengan penyakit hati, pasien sklerosis.88
Eksosom adalah vesikel membran dengan diameter 40–160 nm;beberapa vesikel intraseluler menyatu dengan membran sel dan dilepaskan ke dalam matriks ekstraseluler.Mereka mengandung banyak komponen aktif, termasuk lipid, protein, RNA dan DNA, dan memainkan peran kunci dalam komunikasi antar sel, baik sel HCC maupun non-HCC.89,90 Eksosom mengatur perkembangan HCC dengan mengaktifkan fibroblas hepatosit dan sel stellata, sel imun, hepatosit normal, dan sel HCC.91 Dalam lingkungan mikro tumor, sel tumor menghasilkan sejumlah besar eksosom yang dibawa dari sel kanker ke sel yang belum matang, yang pada gilirannya terlibat dalam onkogenesis, degradasi, dan pensinyalan seluler.92 Studi telah menunjukkan bahwa eksosom dapat mentransfer onkogen ke sel normal selama proses patologis, yang mungkin merupakan salah satu mekanisme invasi tumor dan metastasis.93 Peran eksosom dalam perkembangan kanker mungkin dinamis dan spesifik untuk jenis kanker, 89 Eksosom dapat diinternalisasi oleh sel yang berdekatan atau jauh untuk mengatur beberapa gen target dalam sel penerima yang mungkin terlibat dalam ion komunikasi antar sel dan interaksi lingkungan mikro seluler, mereka mungkin memediasi sinyal seluler dan metabolisme.94 Karakteristik dan perubahan dinamis molekul kargo eksosom secara langsung mencerminkan karakteristik dan perubahan dinamis sel tumor induk,95 yang juga menjadi dasar penggunaan eksosom dalam diagnosis dan prognosis kanker, serta untuk memprediksi respons individu terhadap terapi antikanker ..96
Metode laboratorium tradisional untuk mengisolasi dan menganalisis eksosom adalah kompleks, multi-langkah, dan memakan waktu, termasuk ultrasentrifugasi, filtrasi, kromatografi eksklusi ukuran, pemurnian imunoaffinitas, Western blotting, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), PCR, dan analisis aliran.sistem miniatur dan platform lab-on-a-chip menggunakan mikro/nanoteknologi sedang dikembangkan secara luas untuk isolasi eksosom in situ yang cepat dan nyaman.Analisis pelacakan nanopartikel (NTA) adalah metode yang banyak digunakan untuk mengkarakterisasi ukuran dan konsentrasi eksosom, termasuk metode seperti nanopartikel magnetik dan polihidroksialkanoat.Metode mikrofluida dan elektrokimia juga dapat dengan cepat mendeteksi eksosom dalam hasil tinggi.
Protein eksosom adalah penanda penting untuk diagnosis HCC.Dalam studi Arbelaiz, tingkat 98 protein pengikat RasGAP SH3 (G3BP) dan reseptor imunoglobulin polimer (PIGR) meningkat secara signifikan pada eksosom yang diturunkan dari HCC, dan kemanjuran gabungan yang diduga dari kedua protein tersebut lebih unggul daripada AFP.Kelebihan zat besi merupakan faktor penting yang berkontribusi terhadap perkembangan HCC.Tseng melaporkan bahwa hepcidin mungkin memainkan peran kunci dalam resistensi terhadap HCC.99 Eksosom yang berasal dari serum pasien HCC memiliki jumlah salinan varian mRNA hepcidin yang jauh lebih tinggi daripada rekan mereka yang sehat, menunjukkan bahwa hepcidin mungkin merupakan biomarker diagnostik baru untuk HCC.Protein 14-3-3ζ dalam eksosom yang dihasilkan oleh 100 HCC dapat mengurangi aktivasi, proliferasi, dan diferensiasi sel T dan dapat menginduksi transformasi sel T menjadi sel T regulator, yang mengakibatkan deplesi sel T.101 Hal ini didukung oleh beberapa penelitian yang menyelidiki penghindaran tumor dari pengawasan imun, 102 yang dapat berkontribusi pada tumorigenesis HCC.
Selain keberadaan ecRNA dalam plasma atau serum, eksosom yang diperkaya RNA dapat digunakan untuk pementasan waktu nyata non-invasif dalam skrining tumor awal dan untuk menentukan evolusi tumor dan respons terhadap terapi.Kadar miRNA-21 eksosomal dalam serum darah pada kelompok HCC 2,21 kali lebih tinggi dari pada kelompok CHB, dan pada kelompok HCC 5,57 kali lebih tinggi dari pada populasi sehat.Dalam studi Wang, eksosom secara signifikan meningkatkan HCC dibandingkan dengan pasien sirosis dengan nilai AUC 0,83 (95% CI 0,74-0,93) dan 0,94 (95% CI 0,88-1,00).104 Data yang diperoleh menjelaskan keterlibatan molekul kargo eksosomal spesifik dalam regulasi onkogenesis dan perkembangan HCC.105 Ekspresi serum miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 dan miR-26a konsisten.dan metastasis, dan kadar miR21 jauh lebih tinggi pada pasien HCC dibandingkan dengan kontrol yang sehat dan juga pada pasien CHB.102 LncRNA memiliki nilai diagnostik potensial pada HCC.Penelitian telah menunjukkan bahwa eksosom yang berasal dari serum pasien HCC memiliki tingkat LINC00161, LINC000635, dan lncRNA yang secara signifikan lebih tinggi yang diaktifkan oleh transformasi faktor pertumbuhan-β daripada pada pasien tanpa HCC, dan lncRNA ini sangat terkait dengan stadium TNM dan volume tumor.110 Conigliaro dkk.Eksosom CD90+ ditemukan mengekspresikan tingkat lncRNAH19 yang tinggi, yang secara signifikan meningkatkan pelepasan faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF) dan produksi reseptor VEGF-R1, sehingga merangsang angiogenesis.93 CircRNA adalah jenis lain dari ncRNA eksosom – diekspresikan pada tingkat yang lebih rendah tetapi stabil di seluruh spesies, circRNA juga menunjukkan spesifisitas untuk tipe sel, tipe jaringan, tahap perkembangan, dan aktivitas regulasi.111 circRNAs adalah biomarker diagnostik untuk kanker awal dan invasif minimal.112 Uji klinis terbaru menunjukkan bahwa spesifisitas miRNA individu dalam memprediksi HCC tidak ideal.Oleh karena itu, deteksi kompleks menggunakan beberapa tes (misalnya, miR-122 dan miR-48a dalam kombinasi dengan AFP) dapat meningkatkan identifikasi HCC dini dan diferensiasi HCC dari sirosis.100
Pasien dengan CHB dan sirosis hati adalah kelompok risiko tinggi yang paling umum untuk mengembangkan HCC.Untuk kelompok berisiko tinggi, setelah tanggapan virologi bertahan tercapai, strategi surveilans hemat biaya berdasarkan risiko kanker hati harus dikembangkan, dan skrining dini adalah kunci untuk meningkatkan diagnosis dan pengobatan kanker hati dengan rasio efektivitas biaya tinggi2 ..Metode skrining dini untuk kanker memiliki banyak keterbatasan: metode skrining dini yang efektif belum dikembangkan untuk sebagian besar jenis kanker, dan kepatuhan biasanya rendah.Dibandingkan dengan metode skrining dini tradisional, teknologi biopsi cair memiliki keunggulan yang jelas: kemudahan pengambilan sampel, deteksi panrac, reproduktifitas sampel yang baik, dan respons yang efektif terhadap heterogenitas tumor.Mengingat efektivitas biaya metode yang terkait dengan biopsi cair, penggunaannya dalam skrining HCC belum diuji secara rutin.Meskipun kemajuan dalam deteksi akurat pada tingkat molekuler, biopsi cairan mahal untuk mendeteksi HCC pada pasien target, membatasi penggunaannya secara luas dibandingkan dengan prosedur pencitraan spesifik seperti ultrasound dan pencitraan resonansi magnetik.113.114 Namun, penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa biopsi cair menunjukkan manfaat yang signifikan dalam hal tahun hidup yang disesuaikan dengan kualitas (QALYs).115 Manfaat biopsi cair pada karsinoma awal lambung dan nasofaring juga telah ditunjukkan.116.117 Pandangan saat ini adalah bahwa biopsi cair dapat melengkapi biomarker serum dan skrining radiologis dalam deteksi dan diagnosis tumor.117 118
Menurut literatur saat ini, teknologi biopsi cairan telah menunjukkan sensitivitas dan spesifisitas yang lebih tinggi secara signifikan dalam skrining awal kelompok berisiko tinggi untuk kanker hati.Terlepas dari jenis biopsi cairan, dapat membedakan HCC dari individu berisiko tinggi tanpa HCC, menunjukkan pentingnya skrining dini karena perbedaan antara individu berisiko tinggi dan sehat terlihat jelas.ctDNA memiliki waktu paruh yang pendek dan dapat digunakan untuk mendeteksi HCC, sehingga setiap perubahan pada cDNA yang diturunkan dari tumor dapat memberikan bukti nyata perkembangan tumor, terutama untuk tumor kecil.Tingkat ctDNA yang tinggi menunjukkan perkembangan dan penyebaran kanker dan merupakan indikator awal perkembangan dan kekambuhan.Selain itu, berdasarkan hasil ctDNA, pasien dapat menerima perawatan individual dan tindak lanjut.119 Situs metilasi spesifik mungkin merupakan penanda yang lebih baik daripada AFP untuk identifikasi awal kanker hati dan nodul sirosis.Dalam kasus HCC yang dapat direseksi, kadar cDNA yang tinggi merupakan indikasi invasi mikrovaskular dan kekambuhan serta metastasis pascaoperasi.Perubahan jumlah salinan dikaitkan dengan kelangsungan hidup pasien dengan HCC.Dapat diasumsikan bahwa evaluasi cDNA mungkin terlibat dalam pengobatan HCC secara keseluruhan, dan cDNA dapat berfungsi sebagai indikator modulasi terapeutik yang efektif.Penanda berdasarkan mutasi genetik spesifik pada ctDNA telah diadopsi oleh pedoman klinis untuk memprediksi kemanjuran dan memantau resistensi obat.Tes ctDNA mungkin merupakan alat biopsi cair yang paling berguna untuk skrining awal.CTC juga memainkan peran kunci dalam skrining awal kelompok HCC berisiko tinggi.Berbagai penanda CTC terkait HCC sangat penting dalam onset, pengembangan, dan kekambuhan HCC.Sebagai vesikel membran, eksosom terlibat dalam komunikasi antar sel, terutama dalam sel HCC.MicroRNA yang bersirkulasi stabil dalam darah dan dengan demikian mungkin lebih berguna untuk skrining awal HCC.Secara bertahap, protein eksosomal dan eksosom kaya RNA ditemukan, dan kemanjuran prediktifnya untuk HCC dikonfirmasi.Menariknya, etiologi HCC yang berbeda juga dapat dikaitkan dengan mutasi yang berbeda, sehingga kami dapat memilih biomarker yang berbeda untuk skrining awal berdasarkan etiologi HCC yang berbeda.120
Namun, teknik biopsi cairan saat ini dipertanyakan dalam hal stabilitas dan tidak dapat secara mandiri melakukan skrining awal atau pemantauan HCC, tetapi masih dapat melengkapi skrining dan diagnosis individu.121 Sebagai bentuk biopsi cair, deteksi dan pencitraan ctDNA, CTC, cfRNA dan AFP atau PIVKA-II terkait eksosom memiliki aplikasi yang menjanjikan dalam diagnosis dini dan prognosis HCC.Namun, mekanisme pasti pelepasan ctDNA ke dalam darah masih harus dijelaskan.Mengungkap sifat biologis dasar ctDNA dapat memfasilitasi penggunaannya sebagai penanda.Jumlah kecil ctDNA dalam sirkulasi dan persyaratan penanganan sampel yang ketat merupakan tantangan untuk implementasi klinis deteksi cDNA di HCC.Selain itu, mutasi genetik tidak memiliki ciri khusus yang memungkinkan identifikasi karsinogen secara akurat.Sejak beberapa varian genetik dan somatik juga hadir dalam jaringan normal, mutasi genetik yang diidentifikasi oleh biopsi cairan mungkin kegunaan terbatas dalam skrining awal untuk HCC.122 Keterbatasan target gen yang berguna dan biomarker yang membantu membedakan cDNA dari DNA non-tumor adalah masalah yang paling penting dalam penggunaan cDNA.kurangnya kegunaan penanda sensitif dan spesifik untuk mendeteksi CTC.Hanya sel yang layak dengan potensi metastasis yang ditemukan, dan kombinasi optimal dari penanda yang diperkaya CSC tidak jelas.Isolasi CTC untuk kultur dan evaluasi profil mutasinya juga merupakan tugas yang menantang.Karena masalah dengan identifikasi, isolasi dan pemurnian eksosom, mekanisme molekuler spesifik masih belum jelas, dan penelitian sebelumnya tentang mekanisme eksosom dan HCC belum mendalam, dan cara miRNA, lncRNA, dan protein diurutkan ke dalam eksosom. , dan tidak jelas apakah pengambilan eksosom adalah proses tipe tertentu.Penggunaan eksosom untuk diagnosis dan pengobatan kanker hati masih dalam tahap praklinis.Kurangnya standarisasi prosedur biopsi cair, seperti jenis tabung yang digunakan untuk mengumpulkan darah, volume darah, penyimpanan dan deteksi sampel, isolasi dan pengayaan, dapat menghalangi penggunaannya dalam praktik klinis rutin karena perbedaan praktik di seluruh pusat medis.Kemanjuran biopsi cair dalam skrining awal, diagnosis, evaluasi kemanjuran, dan prediksi HCC masih harus dieksplorasi, terutama untuk kelompok berisiko tinggi.Teknologi biopsi cair memiliki potensi besar dan diharapkan dapat digunakan secara luas dalam praktik klinis kanker hati dalam waktu dekat.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL dkk.Statistik Kanker Global 2020: GLOBOCAN memperkirakan insiden dan kematian dari 36 jenis kanker di 185 negara.CA Kanker J Clin.2021;71(3):29-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Markas Besar Komisi Kesehatan Nasional.Kriteria diagnosis dan pengobatan kanker hati primer (edisi 2022) [J].Jurnal Penyakit Hati Klinis, 2022, 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, dkk.Pedoman diagnosis dan pengobatan karsinoma hepatoseluler (edisi 2019).Kanker hati.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, dkk.Pedoman praktik klinis untuk karsinoma hepatoseluler: Masyarakat Jepang untuk Penyakit Hati, 2017 (panduan ke-4 JSH-HCC), pembaruan 2019.Waduk Penyakit Hati.2019;49(10):1109–1113.doi: 10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsi cair pada penyakit hati kronis.Ann Hepato.2021;20:10197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biopsi kanker payudara cair: tinjauan terfokus.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Surveilans untuk karsinoma hepatoseluler: praktik terbaik saat ini dan arah masa depan.Gastroenterologi.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Asosiasi Riset Eropa L, Organisasi Eropa R, C Terapi.Pedoman klinis EASL-EORTC: pengobatan karsinoma hepatoseluler.J. Heparin.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK dkk.Analisis gabungan AFP dan HCCR-1 sebagai penanda serologis yang berguna pada karsinoma hepatoseluler kecil: studi kohort prospektif.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10,3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, dkk.Ekspresi diferensial microRNA-125b plasma pada penyakit hati terkait virus hepatitis B dan potensi diagnostik karsinoma hepatoseluler yang diinduksi virus hepatitis B.Reservoir penyakit hati.2017;47(4):312-320.doi: 10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologi dan signifikansi alfa-fetoprotein pada karsinoma hepatoseluler.hati int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, dkk.Pedoman klinis untuk pengobatan karsinoma hepatoseluler di kawasan Asia-Pasifik: pembaruan 2017.Organisasi Internasional untuk Penyakit Hati.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei dkk.Nilai diagnostik serum PIVKA-II sendiri atau dalam kombinasi dengan AFP pada pasien Cina dengan karsinoma hepatoseluler.Dis Mark.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Non-sel kecil kanker paru-paru non-plasma cairan humoral biopsi: lebih dekat ke tumor!sel.2020;9(11).doi: 10.3390/sel9112486
15. Mader S, Pantel K. Biopsi cair: status saat ini dan prospek masa depan.Pengobatan Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, dkk.Biopsi kanker berbasis cairan: alat diagnostik multimodal dalam onkologi klinis.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Asam nukleat dalam plasma manusia.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, dkk.Deteksi lanjutan DNA tumor yang bersirkulasi dengan analisis ukuran fragmen.Sains menerjemahkan obat.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Panjang fragmen DNA tumor yang beredar.gen PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Beredar DNA tumor: biomarker yang menjanjikan dalam biopsi kanker berbasis cairan.tumor sasaran.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Deteksi DNA tumor yang bersirkulasi pada tahap awal dan akhir keganasan manusia.Sains menerjemahkan obat.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biopsi cair untuk analisis prediksi mutasi kanker padat: perspektif ahli patologi.J. Bioteknologi.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, dkk.Deteksi tumor dini dengan skrining DNA plasma yang beredar: hype atau harapan?hukum klinis Belgia.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Pengaruh virus hepatitis dan penuaan pada metilasi DNA pada hepatokarsinogenesis manusia.Histopatologi.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647